范围

本方法规定了体外皮肤变态反应：人细胞系活化试验的基本原则、要求和方法。

本方法适用于可溶或者能形成稳定分散体系的化妆品用化学原料安全性毒理学检测。

实验目的

预测和评价化妆品用化学原料是否具有潜在皮肤致敏性。

试验方法

3.1  试验材料与试剂

3.1.1  细胞

3.1.2  培养基

3.1.3  磷酸盐缓冲液（PBS）

3.1.4  染色缓冲液

3.1.5  染料和抗体类物质

7-氨基放线素菌-D染料（7-AAD）

FITC标记的小鼠单克隆CD86抗体（FITC-CD86）

PE标记的小鼠单克隆CD54抗体（PE-CD54）

FITC标记的小鼠IgG1 （FITC-IgG1）

PE标记的小鼠IgG1 （PE-IgG1）

Fc段受体阻断剂（Fc-Blocker） 

3.1.6  受试物储备液

3.1.7  受试物工作液

3.1.8  溶剂选择

选用DMSO、1640完全培养基或者生理盐水作为溶剂。在证明溶剂不影响测试结果的情况下，可使用除生理盐水，培养基，DMSO以外的其他溶剂。

3.1.9  阳性对照

3.1.10  阴性对照

3.2  试验步骤

3.2.1  细胞培养

3.2.2  细胞稳定性检测

3.2.3  CV75浓度确认

a：超过75%的最低细胞存活率（%）

b：a对应的受试物浓度（μg/mL）

c：未超过75%的最高细胞存活率（%）

d：c对应的受试物浓度（μg/mL）

3.2.4  CD86、CD54表达检测

3.2.5  流式细胞仪

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